摘要：對(duì)上海飛測(cè)生物科技有限公司研發(fā)生產(chǎn)的玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條在糧食谷物飼料中的檢測(cè)性能進(jìn)行了評(píng)估。該產(chǎn)品的最低檢出限（LOD）為0.29μg/kg，最低定量限(LOQ)為0.91μg/kg，線性范圍為1.00-50.00μg/kg，線性范圍內(nèi)的添加回收率為92.89%~121.07%，3次重復(fù)的變異系數(shù)在14.56%以內(nèi)。與其他真菌毒素的交叉反應(yīng)率均小于5%。該產(chǎn)品具有操作簡(jiǎn)便、靈敏準(zhǔn)確、快速定量、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，適合用于對(duì)糧食谷物飼料中玉米赤霉烯酮的進(jìn)行快速定量測(cè)定。

      關(guān)鍵詞：玉米赤霉烯酮檢測(cè)試紙條；熒光定量免疫層析；玉米赤霉烯酮；糧食谷物飼料

玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)又稱F-2毒素，主要由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生。它首先從有赤霉病的玉米中分離得到，是一種酚的二羥基苯酸的內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，分子式為C18H22O5。玉米赤霉烯酮常污染玉米小麥、大米、大麥、小米和燕麥等谷物。玉米赤霉烯酮具有雌激素的作用，其強(qiáng)度為雌激素的十分之一，可造成家禽和家畜的雌激素水平提高。目前發(fā)現(xiàn)，豬對(duì)此毒素較為敏感。玉米赤霉烯酮作用的靶器官主要是雌性動(dòng)物的生殖系統(tǒng)，同時(shí)對(duì)雄性動(dòng)物也有一定的影響，可使家畜，家禽和實(shí)驗(yàn)小鼠產(chǎn)生雌性激素亢進(jìn)癥。妊娠期的動(dòng)物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流產(chǎn)、死胎和畸胎。由于玉米赤霉烯酮具有以上危害，已經(jīng)被聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）和世界衛(wèi)生組織（WHO）確定為最危險(xiǎn)的自然發(fā)生的食品污染物之一。我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2761-2011（食品中真菌毒素限量）中對(duì)谷物及其制品中的ZEN最高限量要求為60μg/kg。GB 13078.2-2006 《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 飼料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允許量》，不同種類的飼料中玉米赤霉烯酮的最高限量標(biāo)準(zhǔn)為500μg/kg

目前，國(guó)標(biāo)法測(cè)定玉米赤霉烯酮采用HPLC法，需要大型的儀器設(shè)備，價(jià)格昂貴，操作過程復(fù)雜、時(shí)間較長(zhǎng)，且無法在現(xiàn)場(chǎng)和基礎(chǔ)小型實(shí)驗(yàn)室使用。除此之外，也有采用玉米赤霉烯酮酶聯(lián)免疫試劑盒或膠體金快速檢測(cè)試紙條用于大量樣品的篩查，操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)快速，成本也較低，但準(zhǔn)確性和重復(fù)性較差，容易造成假陽(yáng)性或者假陰性。因此，急需一種既簡(jiǎn)便快速，又能準(zhǔn)確定量的檢測(cè)方法，熒光定量免疫層析正好可以滿足這種需求。本文通過對(duì)多種糧食谷物飼料樣品的實(shí)測(cè)，驗(yàn)證了上海飛測(cè)生物開發(fā)的玉米赤霉烯酮熒光定量快速檢測(cè)試紙條的技術(shù)性能。

1實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1試劑和材料

除注明外，均為分析純，試驗(yàn)用水均為UP水。

玉米赤霉烯酮熒光熒光定量檢測(cè)試紙條（由包被有熒光微球標(biāo)記玉米赤霉烯酮抗體的乳膠墊、噴涂有玉米赤霉烯酮抗原的檢測(cè)線和噴涂有羊抗雞二抗的控制線的NC膜、樣品墊及吸收墊組成）、樣品提取液、樣品稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)曲線ID卡及標(biāo)準(zhǔn)曲線條形碼均由上海飛測(cè)生物科技有限公司提供。

玉米赤霉烯酮及其他真菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)品：購(gòu)自Sigma公司；

大米、玉米、小麥、面粉等樣品從超市購(gòu)得或從企業(yè)取樣。

麩皮，小麥、面粉等飼料樣品從飼料廠和企業(yè)取樣。

1.2儀器與設(shè)備

FD-100型熒光免疫定量分析儀和FD-5000型試紙條恒溫孵育器，上海飛測(cè)生物科技有限公司提供；低速離心機(jī)，上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司；漩渦振蕩器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；電子天平：Sartorius；

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1樣品的前處理

取具有代表性的待測(cè)樣品500g，用小型粉碎機(jī)粉碎1min后過20目篩，收集過篩的細(xì)小樣品。稱取1.0±0.02g過篩的樣品于10mL離心管中，加入5mL提取液，用漩渦混勻儀震蕩5min(或者搖床振蕩10min）后，4000RPM離心1min，取上清。

1.3.2檢測(cè)過程

取50μL離心上清液加入500μL樣品稀釋液中，用漩渦混勻器混勻3-5s，然后取100μL加入到玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條的加樣孔中，置于37℃恒溫孵育器中溫育10min后，將試紙條插入熒光免疫定量分析儀中讀數(shù)，即為樣品的實(shí)際檢測(cè)濃度。當(dāng)檢測(cè)值大于5000μg/kg時(shí)，可用提取液將離心上清液稀釋5倍后再進(jìn)行檢測(cè)，所得讀數(shù)值乘以對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為最終的檢驗(yàn)結(jié)果。

2檢測(cè)結(jié)果分析

2.1線性范圍與檢出限

在樣品提取液中，分別添加10.00μg/kg、25.00μg/kg、50.00μg/kg、100.00μg/kg、250.00μg/kg、500.00μg/kg 、1000μg/kg的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品，用上海飛測(cè)生物玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條每個(gè)樣品檢測(cè)3次，以添加濃度為為縱坐標(biāo)，以熒光定量檢測(cè)試紙條的檢測(cè)結(jié)果為橫坐標(biāo)，擬合曲線并計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)，結(jié)果如下：

圖1 玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品添加與熒光定量試紙條檢測(cè)值的線性關(guān)系

計(jì)算得出小麥的線性范圍：10.00～1000.00μg/kg（7點(diǎn)）， 回歸方程: y = 1.107x + 0.011，相關(guān)系數(shù)，R2 = 0.998；（見圖1）。

取10個(gè)無污染（陰性）小麥樣品和10個(gè)無污染（陰性）玉米樣品，用上海飛測(cè)生物玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條每個(gè)樣品檢測(cè)3次，檢測(cè)限（LOD）為測(cè)定平均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差，定量限(LOQ)為測(cè)定平均值加10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)試結(jié)果表明，玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條的LOD為3.65μg/kg，LOQ為8.51μg/kg。

2.2準(zhǔn)確性和重復(fù)性分析

在用國(guó)標(biāo)法測(cè)定為0的不同種類空白樣品中分別添加玉米赤霉烯酮濃度為1.00，2.50，5.00，10.00，25.00，50.00μg/kg的標(biāo)準(zhǔn)品，然后按照玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果見表1。

表1  不同樣本檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性

從表1可以看出，上海飛測(cè)生物科技有限公司所生產(chǎn)的玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條測(cè)試不同糧食谷物中玉米赤霉烯酮的添加回收率在94.00%~118.33%，3次重復(fù)的變異系數(shù)在13.11%以內(nèi)。
      2.3與色譜方法的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果

取大米、小麥、玉米、高粱、花生、麩皮、噴漿玉米、DDGS、豆粕受污染樣品各1份，先采用國(guó)標(biāo)液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，再使用上海飛測(cè)生物科技有限公司所生產(chǎn)的玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條進(jìn)行測(cè)定，各測(cè)試3個(gè)平行樣。檢測(cè)結(jié)果如下：

表3  玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)卡與高效液相色譜法檢測(cè)值對(duì)比

表2表明，在不同的糧食谷物飼料中，上海飛測(cè)生物科技有限公司所生產(chǎn)的玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條與液相色譜法的符合率為99.66%~111.87%，3次重復(fù)測(cè)定的的CV值在13.68%以內(nèi)。

      2.4方法特異性

選擇其他5種常見的真菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)品在陰性玉米中進(jìn)行添加，添加的濃度為1000 μg/kg，然后用飛測(cè)生物玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條進(jìn)行測(cè)試，每個(gè)樣品測(cè)3次取平均值；結(jié)果顯示與赭曲霉毒素A，伏馬菌素B1，嘔吐毒素、T-2毒素、黃曲霉毒素B1交叉反應(yīng)率均＜5%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條對(duì)伏馬毒素、赭曲霉毒素、嘔吐毒素、黃曲霉毒素B1幾乎無交叉反應(yīng)，其方法特異性可以能滿足檢測(cè)要求。

表3 交叉反應(yīng)率表

3結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用上海飛測(cè)生物科技有限公司所生產(chǎn)的玉米赤霉烯酮熒光定量檢測(cè)試紙條對(duì)不同的糧食谷物飼料樣本進(jìn)行測(cè)試，該產(chǎn)品的最低檢出限LOD為3.65μg/kg，最低定量限LOQ為8.51μg/kg，線性范圍為10.00-1000.00μg/kg，線性范圍內(nèi)的添加回收率為94.00%~118.33%，3次重復(fù)的變異系數(shù)在13.11%以內(nèi)。與其他真菌毒素的交叉反應(yīng)率均小于5%。其準(zhǔn)確性和可靠性均可以滿足歐盟和我國(guó)對(duì)玉米赤霉烯酮的分析標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)要求。該方法具有簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好等特點(diǎn)，可用于不同糧食谷物飼料中玉米赤霉烯酮的快速定量檢測(cè)分析。

相關(guān)新聞

• ·   玉米赤霉烯酮檢測(cè)試劑盒-熒光定量免疫層析...[2015-12-14]
• ·   熱烈祝賀上海飛測(cè)子公司-南京微測(cè)生物成功...[2019-01-30]
• ·   上海飛測(cè)誠(chéng)邀您共赴2018中國(guó)飼料工業(yè)展覽會(huì)...[2018-04-13]
• ·   上海飛測(cè)誠(chéng)邀您與我們一起參加第二屆全國(guó)飼...[2019-05-17]
• ·   新一代黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測(cè)試紙條...[2017-03-23]
• ·   玉米中霉菌毒素快速定量檢測(cè)儀，新一代僅需...[2017-03-05]
• ·   清明放假通知[2019-04-03]
• ·   上海飛測(cè)生物嘔吐毒素快速檢測(cè)系統(tǒng)[2018-02-05]
• ·   真菌毒素檢測(cè)儀-10min快速定量測(cè)定谷物飼料...[2016-06-24]
• ·   嘔吐毒素檢測(cè)儀-10min快速準(zhǔn)確定量測(cè)定...[2016-05-01]